I et desperat forsøk på å leve et normalt liv og redde forholdet til kjæresten MJ (Kirsten Dunst), gir Peter Parker (Tobey Maguire) slipp på identiteten som Spider-Man. Men en hensynsløs og fryktinngytende ny kjeltring, den tentakelrike Doc Ock, tvinger Peter tilbake i begivenhetenes sentrum slik at han kan redde alt og alle han har kjær.